Najpoznatiji je kao pionir američke industrije animacija, nakon što je predstavio nekoliko otkrića vezanih za produkciju crtanih filmova. Kao filmski producent drži rekord kao osoba koja je dobila najviše Oskara, što uključuje 22 Oskara i 59 nominacija za tu nagradu.

Njegov Miki Maus se prvi put pojavio 1928. godine u prvom zvučnom crtanom filmu Parobrod Willie. Miki je zapravo nastao nekoliko godina ranije. Kada je imao 25 godina, Disneyu su u Metro-Goldwyn-Mayeru predskazivali da nikada neće uspjeti prodati ovaj lik. Miša je najprije nazvao po kućnom ljubimcu Mortimeru, ali se takvom imenu usprotivila njegova žena, pa je ono promijenjeno u Miki.

Miki Maus je postao jedan od najpoznatijih animiranih likova popularne kulture i simbol cijele kompanije. Poslije Mikija se pojavila čitava serija likova koje je kreirao isti studio. Ovi likovi u animiranim filmovima i stripovima, uz prateću industriju, koju je projektirao Disney sa svojim saradnicima, brzo su se pročuli po cijelom svijetu, a materijal koji su radili je bio dovoljno univerzalan da je omogućio prelaske čak i ideoloških prepreka. Disneyeva produkcija je bila poštovana i hvaljena čak i u Sovjetskom Savezu tridesetih godina prošlog stoljeca za vrijeme Staljina, a vještom primjenom Disneyeve animacijske tehnike i stila, u nacističkoj Njemačkoj je obrazovana posebna grupa animatora, koja je svoja umijeća koristila u humorističke ili propagandne svrhe.